（总）大肠杆菌（群）、大肠菌群（近似值）检测

总大肠杆菌（群）与大肠菌群（近似值）检测概述

总大肠杆菌群和大肠菌群（近似值）是评价水体、食品及环境样品卫生安全性的核心微生物指标。总大肠杆菌群包括大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌等需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性杆菌，其存在与粪便污染高度相关，是判断样品是否受病原微生物污染的指示性生物。而大肠菌群（近似值）则通过特定培养条件（如乳糖发酵）快速反映样品中可能存在的肠道致病菌风险。二者的检测在饮用水安全评估、食品加工过程控制及环境监测中具有重要公共卫生意义。

检测项目与核心目标

检测项目主要包括：
1. 总大肠杆菌群数量：反映样品受粪便污染的总体水平
2. 大肠菌群近似值（MPN）：通过统计学方法估算单位体积中的菌落数
3. 耐热大肠菌群（粪大肠菌群）：特异性检测经44.5℃培养仍存活的菌群
4. 大肠埃希氏菌（E.coli）：作为粪便污染的直接证据

主要检测仪器设备

检测过程中需配置仪器：
- 膜过滤装置（孔径0.45μm）
- 恒温培养箱（35±0.5℃、44.5±0.5℃）
- 紫外可见分光光度计（比色法检测）
- 全自动微生物鉴定系统（如VITEK 2 Compact）
- 荧光PCR仪（快速分子检测）
- 多管发酵法专用培养管组

标准检测方法体系

现行主要检测技术包括：

1. 多管发酵法（MPN法）

依据GB 5750.12-2023《生活饮用水标准检验方法》，通过初发酵、复发酵和证实试验三步确认，适用于低浊度样品检测，检测限可达1 CFU/100mL。

2. 滤膜法

采用ISO 9308-1:2014标准，将样品通过0.45μm膜过滤后，置于m-Endo LES培养基上培养，24小时内观察典型金属光泽菌落，检测效率高且适合批量检测。

3. 酶底物法

基于EPA 1603方法，利用β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖醛酸酶特性，通过显色反应（如Colilert试剂）实现48小时内定性定量检测，特异性达95%以上。

现行检测标准体系

主要遵循以下标准规范：
- GB 5749-2022 生活饮用水卫生标准（限值：不得检出/100mL）
- GB 4789.3-2016 食品微生物学检验大肠菌群计数
- ISO 9308-1:2014 水质检测通用方法
- APHA 9222B 标准方法（美国公共卫生协会）
- EPA Method 1604 膜过滤法技术规范

质量控制要点

检测过程需严格实施：
- 培养基每批次进行阳性/阴性对照验证
- 培养温度偏差控制在±0.5℃内
- 使用ATCC标准菌株（如E.coli 25922）进行方法确认
- 实验环境应符合生物安全二级（BSL-2）要求
- 数据记录需包含原始培养特征照片及复核记录