奶糖糖果志贺氏菌检测,第三方检测机构|北京中科光析科学技术研究所

奶糖糖果是以乳制品、砂糖、油脂及明胶等原料经熬煮、调和、成型制成的含水分较高、营养丰富的一类糖果，属于即食食品。此类产品若原料乳品受污染或生产环节卫生控制不当，可能携带志贺氏菌，引发食源性疾病风险。围绕奶糖糖果志贺氏菌检测，本文按检测原理、样品制备与增菌培养、PCR快速鉴定、分离培养与生化鉴定、ELISA法与血清学分型、结果判定与报告的完整流程展开，为相关企业及检测人员提供可操作的方法参考。

检测原理与机制

志贺氏菌属肠杆菌科，为革兰氏阴性短杆菌，无芽孢、无荚膜，多数无鞭毛。其致病物质主要侵袭质粒抗原及志贺毒素，可侵袭结肠上皮细胞引发细菌性痢疾。检测的总体思路为：先以选择性增菌培养基促使目标菌在杂菌抑制条件下增殖，再结合分离培养、生化反应与血清学凝集试验完成鉴定。分子生物学方法则以侵袭性基因及质粒抗原基因为靶标，采用PCR扩增判定样本中是否含有该菌核酸序列。各类方法相互印证，构成从初筛到确证的多层次检测体系。

样品制备与增菌培养

样品制备遵循无菌操作原则。以无菌方式称取奶糖糖果样品约25g，置于无菌均质袋内。奶糖质地黏稠、含糖量高，宜先用无菌剪刀剪切成小块，再加入适量无菌磷酸盐缓冲液或蛋白胨水，均质制成初始悬液。将悬液接入志贺氏菌增菌液，于适宜温度进行前增菌与选择性增菌两阶段培养。前增菌以恢复受损菌株的生理活性为主，选择性增菌则依靠培养基中的抑菌成分抑制杂菌生长。操作全程应防止交叉污染，均质器具与称量器皿须经灭菌处理。

PCR法快速鉴定志贺氏菌

PCR法针对志贺氏菌的特异性基因片段设计引物，经变性、退火、延伸的循环扩增后，以凝胶电泳或荧光信号判定扩增结果。该法适用于各类食品样本的初筛，可在增菌培养后短时间内获得定性结论，明显缩短检测周期。操作时应设置阴性对照与阳性对照，以监控扩增体系是否存在污染或抑制。奶糖样品含糖及油脂较高，核酸提取环节宜配合有效的模板纯化步骤，去除抑制物对扩增反应的干扰。扩增产物经电泳后，通过比对条带大小与预期片段位置判定结果，荧光PCR则依据扩增曲线与熔解曲线综合判读。

分离培养与生化鉴定

增菌液划线接种于选择性分离平板，培养后观察菌落形态。志贺氏菌在常用选择性培养基上多呈无色透明或半透明、光滑湿润的较小菌落。挑取可疑菌落转种三糖铁琼脂与营养琼脂斜面，观察斜面与底层的颜色变化及产气、产硫化氢情况。初步符合者 further 进行系列生化试验，赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧、尿素酶、靛基质、枸橼酸盐利用及糖发酵试验等。志贺氏菌的典型生化特征为不产硫化氢、尿素酶阴性、不液化明胶、多数不发�酵乳糖。生化结果符合者判定为可疑菌株，留待血清学分型确证。

ELISA法与血清学分型

ELISA法以志贺氏菌特异性抗体包被固相载体，经抗原抗体反应与酶标记二抗显色，依据吸光度值判定样本中是否含有目标菌抗原。该法操作流程标准化程度高，适用于批量样本的快速初筛，也可用于增菌液的可疑阳性判定。血清学分型则利用志贺氏菌各血清群对应的诊断血清，对生化鉴定符合的纯培养物进行玻片凝集试验。依据与多价血清及单价血清的凝集反应，可将菌株划分为痢疾、福氏、鲍氏、宋内等血清群。分型结果可辅助追溯污染来源，具有流行病学分析价值。

检测结果判定与报告标准

综合判定原则为：分离培养、生化鉴定与血清学凝集三项结果相互吻合，方可报告检出志贺氏菌。若PCR或ELISA初筛阳性而生化与血清学确证阴性，应报告未检出，必要时进行复检核实。报告内容样品信息、检测方法、培养与生化观察结果、血清学分型结论及判定依据。奶糖糖果属即食食品，通常依据食品安全标准中致病菌限量要求执行判定，一般规定为不得检出。检测过程记录、培养物及原始图谱应按规定留存备查，以保证结果的可追溯性。