细菌内毒素（凝胶法和光度法）检测

细菌内毒素检测的重要性与背景

细菌内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁的脂多糖（LPS）成分，具有极强的生物活性，微量存在即可能引发人体发热、休克等严重不良反应。在药品、医疗器械、生物制品及注射用水的质量控制中，内毒素检测是确保产品安全性的关键环节。药典（如USP、EP）及中国药典（ChP）均明确规定了内毒素的限值要求，并通过凝胶法和光度法两种核心方法进行检测。这两种方法基于鲎试剂（LAL）与内毒素的特异性反应原理，具有高灵敏度和可靠性，广泛应用于医药、科研及生产领域。

检测项目及适用范围

细菌内毒素检测的核心目标是定量或定性分析样品中内毒素的含量，主要应用于以下场景：
1. **药品与生物制品**：注射剂、疫苗、血液制品等需确保内毒素限值符合药典规定；
2. **医疗器械**：植入物、导管等与人体直接接触的器械需进行内毒素残留检测；
3. **生产环境监控**：制药用水、洁净区表面擦拭样品的定期检测。

检测仪器与设备

不同检测方法需使用特定仪器：
1. **凝胶法**：恒温水浴锅（37±1℃）、无热原试管、鲎试剂、内毒素标准品；
2. **光度法**：包括动态浊度法和显色基质法，需分光光度计或微板读数仪、恒温孵育器、精密移液器及配套分析软件。

检测方法与操作流程

两种方法的实施步骤及特点如下：
1. 凝胶法（定性/半定量）
- 样品预处理：稀释至适宜浓度并消除干扰因子（如pH调节）；
- 鲎试剂反应：将样品与鲎试剂混合，37℃水浴孵育60分钟；
- 结果判定：通过倒转试管观察凝胶形成，判断内毒素是否超标。
2. 光度法（定量分析）
- 动态浊度法：检测反应液浊度变化速率，通过标准曲线计算内毒素浓度；
- 显色基质法：利用鲎试剂中凝固酶激活显色底物，测定吸光度变化值。

检测标准与合规要求

国内外主要参考标准包括：
1. **中国药典（ChP）**：第四部通则1143详细规定凝胶法与光度法的操作规范；
2. **美国药典（USP <85>）**：明确内毒素限值（如注射用水≤0.25 EU/mL）及验证要求；
3. **标准化组织（ISO 10993-1）**：医疗器械生物相容性评价中的内毒素检测指南。
实验需进行方法验证（包括灵敏度、干扰试验等），并定期校准仪器以确保数据准确性。

方法选择与注意事项

凝胶法适用于快速筛查，成本低但灵敏度较低（0.03-0.5 EU/mL）；光度法可精确量化（检测限达0.001 EU/mL），但需设备。实验需严格控制环境（无热原操作台）、试剂储存条件（2-8℃避光），并定期进行阳性/阴性对照，以避免假性结果。